Scholarship of Research internal

Scholarship of Research Internal /Scholarship of Research Internal / Complete / Article 2016


Status : Complete
By : Profile
Thai name : การประเมินประสิทธิภาพการเป็นแอนติเจน ของโปรตีนลูกผสม GroEL ของเชื้อ Burkholderia pseudomallei เพื่อวินิจฉัยโรคเมลิออยด์ โดย indirect ELISA plate, Dot blot ELISA และ indirect hemagglutination assay
Englsih name : Evaluation of GroEL Burkholderia pseudomallei recombinant antigen for melioidosis diagnosis by indirect ELISA, Dot blot ELISA and indirect hemagglutination assay
Faculty : คณะเทคนิคการแพทย์
Year : 2016
Period : 12 month
ID : 25/2559
ISBN : -

Thai Abstract

        โรคเมลิออยด์เป็นโรคที่เกิดจากการติดเชื้อแบคทีเรีย Burkholderia pseudomallei ผู้ป่วยมีอัตราการเสียชีวิตค่อนข้างสูง เนื่องจากมีอาการคล้ายคลึงกับโรคอื่นๆ ทาให้ยากต่อการวินิจฉัยทางคลินิก ดังนั้นผู้วิจัยจึงมีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินการตรวจวินิจฉัยโรคเมลิออยด์ด้วยวิธี indirect ELISA plate, Dot Blot ELISA และ indirect hemagglutination assay (IHA) ซึ่งสาหรับวิธี indirect ELISA plate และ Dot Blot ELISA ถูกพัฒนาขึ้นโดยใช้ GroEL B. pseudomallei recombinant protein เป็นแอนติเจน ซึ่งทาการกระตุ้นการสร้างโปรตีนจาก GroEL recombinant plasmid (pET24a) ใน E. coli B21 (DE3) ด้วย IPTG ทาโปรตีนให้บริสุทธิ์ด้วยวิธี immobilized metal affinity chromatography (IMAC) วิเคราะห์โปรตีนโดยวิธี SDS-PAGE จากนั้นประเมินการตรวจโดยทดสอบกับซีรั่มจานวนทั้งสิ้น 245 ตัวอย่าง พบว่าวิธี ELISA plate, Dot Blot ELISA และ IHA มีค่าความไว 94.9%, 89.7% และ 66.7% ตามลาดับ มีค่าความจาเพาะ 93.7%, 91.7% และ 87.9% ตามลาดับ แสดงให้เห็นว่าการตรวจด้วยวิธี Dot Blot ELISA ที่พัฒนาขึ้นโดยใช้ GroEL B. pseudomallei recombinant protein เป็นแอนติเจนมีประสิทธิภาพดีในการตรวจวินิจฉัยโรคเมลิออยด์ และเป็นเทคนิคที่ง่าย รวดเร็ว ราคาถูก สามารถใช้ได้ในห้องปฏิบัติการทั่วไป

English Abstract

           Melioidosis is a disease caused by the Burkholderia pseudomallei bacterium. Infected patients mortality rate is quite high because the symptoms are similar to various diseases, making it difficult to diagnose clinically. The aim of this study was to evaluate Indirect ELISA, Dot Blot ELISA and indirect hemagglutination assay (IHA) for diagnosis of melioidosis. For Indirect ELISA and Dot Blot ELISA, GroEL B. pseudomallei recombinant protein was used as antigen. The GroEL recombinant plasmid (pET24a) in E. coli BL21 (DE3) transformant was induced with IPTG. Then recombinant protein was purified by immobilized metal affinity chromatography (IMAC) and analyzed by SDS-PAGE. A total of 245 serum samples were evaluated by the established ELISA plate, dot Blot ELISA and indirect hemagglutination (IHA) methods. The results showed the sensitivity of 94.9%, 89.7% and 66.7% respectively and had specificity of 93.7%, 91.7% and 87.9% และ respectively. This results indicate that Dot Blot ELISA using GroEL B. pseudomallei recombinant protein as antigen is an efficient, simple, rapid and inexpensive technique for the diagnosis of melioidosis and can be used in common laboratory.

Keywords: Recombinant protein GroEL, Burkholderia pseudomallei, Dot Blot ELISA
bursa escort bursa escort